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本试剂盒适用于从各种固定的细胞样本中提取总蛋白，适用于乙醇固定、甲醛固定、多聚甲醛固定、其它混合固定液固定的细胞样本。提取过程简单方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

• 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完！
  
• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

• 提取液制备：
  每500μL蛋白提取液中加入5μL蛋白提取液B，混匀后备用。
  
  • 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的提取液。
• 每1×10⁷个细胞中加入500μL蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
  
• 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温20分钟。
  
• 涡旋振荡10秒混匀。
  
• 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1～2小时。
  
  • 中途每30分钟用移液器吹打混匀。
• 涡旋振荡10秒混匀。
  
• 在12000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
  
  • 组织量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，大约样本体积的3～5倍即可，请根据实际情况调整。
    
  • 建议用BCA法进行蛋白定量。

• 蛋白浓度低？
  固定的细胞组织的蛋白质回收率较低，甲醛固定样本回收率在30%左右。需要加大细胞组织样本上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
  
• WB做不出来？
  固定样本的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
  甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。